طراحی و مطالعه بیوانفورماتیکی ژن صناعی موتانت زیرواحد کاتالیتیک دیفتریاتوکسین (dtxa)

نویسندگان

غلامرضا اولاد

gholam reza olad - faculties of sciences, imam hussein university , tehran, iranتهران- تهرانپارس-حکیمیه- کوی دانشگاه امام حسین(ع)- فاز 2- بلوار شهیدان- خ نشاط- بلوک 59 - واحد 12

چکیده

مقدمه: دیفتری ناشی از باسیل کورینه باکتریوم، بیماری مهلکی است که بقراط در 5 قرن قبل از میلاد آنرا شرح داده است.عامل این بیماری کشنده، اگزوتوکسین dtx می باشد. دیفتریاتوکسین شامل دو زنجیره کاتالیتیک(a) و اتصال دهنده(b) می باشد. این توکسین با واسطه زنجیره bبه رسپتور بسیاری از سلولهای اندام های بدن از جمله میوکارد ، اعصاب محیطی وکلیه ها متصل شده و زنجیره a پس از ورود به سلول، باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلول هدف می شود. تاکنون از توکسوئید این باکتری به عنوان واکسن استفاده شده است. هدف از این مطالعه طراحی و تهیه ژن جهش یافته صناعی زیرواحد کاتالیتیک دیفتریاتوکسین(dtxa) و بررسی های بیوانفورماتیکی لازم به منظور بررسی بیان در وکتور pet28a و تولید پروتئین نوترکیب حاصل از آن، به عنوان کاندید واکسن علیه دیفتری می باشد. مواد و روش ها: پس از تعیین و بهینه سازی ترادف ژن dtxa واجد دو جهش g52e و a158g، وبررسی های بیوانفورماتیکی مربوطه، ژن صناعی در وکتور بیانی تهیه گردیده و صحت آن مورد مطالعه قرار گرفت. سازه ژنی dtxa pet28a/ به میزبان بیانی e.coli bl21 de3 منتقل گردید. سپس بیان و تولید پروتئین نوترکیب حاصل به عنوان کاندید واکسن، با کمک وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: نتایج بیوانفورماتیکی حاصل از بهینه سازی کدون های ژن زیرواحد a دیفتریاتوکسین منجر به سفارش و تهیه ژن صناعی جهش یافته این زیرواحد در وکتور بیانی گردید. آنالیز این ژن در این وکتور با کمک واکنش هضم آنزیمی و الکتروفورز، صحت آن را تائید نمود. پس از بیان و تولید پروتئین نوترکیب ، این پروتئین با وسترن بلات تایید گردید. بحث و نتیجه گیری: با توجه به مزیت های پروتئین نوترکیب dtxa به توکسوئید دیفتری به نظر می آید پروتئین نوترکیب حاصل می تواند جایگزینی مناسب به عنوان کاندید واکسن علیه دیفتریاتوکسین قرار گیرد که نیازمند مطالعات بیشتر می باشد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

طراحی و مطالعه بیوانفورماتیکی ژن صناعی موتانت زیرواحد کاتالیتیک دیفتریاتوکسین (dtxA)

مقدمه: دیفتری ناشی از باسیل کورینه باکتریوم، بیماری مهلکی است که بقراط در 5 قرن قبل از میلاد آنرا شرح داده است.عامل این بیماری کشنده، اگزوتوکسین DTx می‌باشد. دیفتریاتوکسین شامل دو زنجیره کاتالیتیک(A) و اتصال دهنده(B) می‌باشد. این توکسین با واسطه زنجیره Bبه رسپتور بسیاری از سلولهای اندام های بدن از جمله میوکارد ، اعصاب محیطی وکلیه ها متصل شده و زنجیره A پس از ورود به سلول، باعث مهار سنتز پروتئین...

متن کامل

طراحی ژن stxA موتانت (G234E- R170L -A231D) شیگلا دیسانتری و بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب آن

زمینه و هدف: شیگلا دیسانتری یکی از مهمترین باکتری های بیماریزا‌ی روده‌ای انسان است. شیگاتوکسین (سم این باکتری) با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی می شود. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن علیه آن، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در حصول به پروتئین نوترکیب شیگاتوکسین نوع A (stxA) وجود دارد. این مطالعه با هدف بررسی و تعیین جایگاه های مناسب جهش و طراحی ژن سینتتیک زیر واحد ...

متن کامل

همسانه‌سازی ژن زیرواحد بتا هورمون گونادوتروپین جفت انسانی در پی انتقال ژن به اسپرم خروس

هدف از این مطالعه، همسانه‌سازی‌زیرواحد بتای هورمون گونادوتروپین جفت انسانی در ناقل‌ مناسب بود که بتواند از طریق اسپرم در تولید طیور تراریخت به کار گرفته شود. به این منظور زیرواحد بتای این هورمون به کمک یک جفت آغازگر اختصاصی تکثیر و درناقل T همسانه‌سازی شد. فرآیند ترانسفورماسیون پلاسمید نوترکیب در سلول‌های مستعد اشریشیاکلی انجام گرفت و کلونی‌های دارای پلاسمید نوترکیب به‌وسیله PCR انتخاب شدند. صح...

متن کامل

بررسی اثر سینامالدئید بر متیلاسیون پروموتر ژن زیرواحد کاتالیتیک آنزیم تلومراز و بیان ژن آن در سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی انسان

مقدمه: سلول¬های بنیادی مزانشیمی مشتق از چربی(adscs) سلول¬های چند توان هستند که برای اهداف سلول درمانی مورد توجه محققان قرار گرفته اند. یکی از مشکلات اصلی در سلول درمانی، پیری و از دست دادن سرعت رشد و بقای سلول¬ها است. تلومراز یکی از مولکول¬های مهم در پیری سلولی است. بیان این آنزیم در سطوح مختلف کنترل می¬شود. متیلاسیون dna در تنطیم بیان و رونویسی این آنزیم نقش مهمی ایفا می¬کند. ترکیبات گیاهی می¬...

ههمسانه‌سازی، مطالعه بیوانفورماتیکی و بررسی بیان ژن سکوالن ‌سینتاز1 در شیرین‌بیان بومی ایران

شیرین‌بیان (Glycyrrhiza glabra)، یکی از مهم­ترین گیاهان دارویی است که دارای ترکیبات فعال زیستی مانند ساپونین تری‌ترپنوئیدها (گلیسیریزین) و فیتواسترول‌ها است. سکوالن سینتاز (Squalene Synthase)، آنزیم (EC 2.5.1.21) متصل به غشا است که دو مولکول فارنسیل دی­‌فسفات را به سکوالن تبدیل می‌کند. سکوالن پیش ماده اصلی بیوسنتز تری‌ترپن‌ها و استرول‌ها است. در این مطالعه توالی بیان کننده سکوالن ‌سینتاز 1 شیری...

متن کامل

جداسازی و مطالعه بیوانفورماتیکی ژن عامل رونویسی TbJAMYC دخیل در بیوسنتز تاکسول از سرخدار گونه ایرانی

داروی ضد سرطان تاکسول یا پاکلی­تاکسل از متابولیت­های بیوسنتز شده در سرخدار (Taxus bacatta) است. تاکسول یکی از مهمترین و کاربردی­ترین داروهای ضد سرطان در درمان سرطان ریه است که با جلوگیری از پلیمریزاسیون میکروتوبول­ها مانع از تقسیم سلولی در بافت­های سرطانی می­شود. عامل رونویسی JAMYC از خانواده MYC دارای موتیف متصل­شونده به DNA به‎نام bHLH می­باشد که در سایر گونه­های سرخدار شناسایی شده است. هدف ا...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی ایلام

جلد ۲۱، شماره ۵، صفحات ۱۶۰-۱۷۱

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023